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本項(xiàng)研究采用病原生物學(xué)、生物制品學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)開展了牛源致病性壞死梭桿菌和節(jié)瘤擬桿菌的研究，通過(guò)項(xiàng)目攻關(guān)，采用常規(guī)厭氧菌分離方法分離了4株牛源壞死梭桿菌，對(duì)分離菌株進(jìn)行了分子生物學(xué)鑒定；建立了白細(xì)胞毒素啟動(dòng)子區(qū)亞型的鑒定方法；利用高效發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，篩選出適應(yīng)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的利用國(guó)內(nèi)原料的專用壞死桿菌液體培養(yǎng)基；建立了以牛、羊腐蹄病的主要病原節(jié)瘤擬桿菌的DNA檢測(cè)為基礎(chǔ)的高度敏感性和特異性診斷方法；以分離的壞死梭桿菌F4株基因組為模板，PCR擴(kuò)增了壞死梭桿菌白細(xì)胞毒素基因（lktA）的BSBSE和SH基因片段，構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒，檢測(cè)目的蛋白具有反應(yīng)活性；構(gòu)建了壞死梭桿菌白細(xì)胞毒素基因的BSBSE片段和SH片段融合基因原核表達(dá)質(zhì)粒，實(shí)現(xiàn)了BSBSE和SH融合表達(dá)，檢測(cè)融合蛋白具有反應(yīng)活性；利用分離菌株制備的滅活疫苗進(jìn)行了疫苗的免疫推廣，使發(fā)病率由原來(lái)的15%下降到3%以下，有效地控制了腐蹄病的發(fā)生。